RIP
RIP實驗
RIP技術(shù)（RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀），是研究細胞內(nèi)RNA與蛋白結(jié)合情況的技術(shù)，是了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)動態(tài)過程的有力工具，能幫助我們發(fā)現(xiàn)miRNA的調(diào)節(jié)靶點。
RIP這種新興的技術(shù)運用針對目標蛋白的抗體 <https://www.biomart.cn/category/10010101.htm>把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來，然后經(jīng)過分離純化就可以對結(jié)合在復(fù)合物上的RNA進行PCR定量分析。RIP可以看成是普遍使用的染色質(zhì)免疫沉淀ChIP技術(shù)的類似應(yīng)用，但由于研究對象是RNA-蛋白復(fù)合物而不是DNA <https://www.biomart.cn/supply/1008010306.htm>-蛋白復(fù)合物，RIP實驗的優(yōu)化條件與ChIP實驗不太相同（如復(fù)合物不需要固定，RIP反應(yīng)體系中的試劑 <https://www.biomart.cn/supply/10010.htm>和抗體絕對不能含有RNA酶，抗體需經(jīng)RIP實驗驗證等等）。
RIP-seq是RIP與高通量測序相結(jié)合的技術(shù)，通過免疫沉淀目標蛋白來捕獲蛋白體內(nèi)結(jié)合的RNA,將捕獲的RNA進行高通量測序，分析目的蛋白在體內(nèi)結(jié)合的RNA的動態(tài)變化，闡述目的蛋白對基因表達調(diào)控的分子機制。RIP不僅能研究miRNA與蛋白的作用，還可以研究lncRNA與蛋白的互作。
RIP具體實驗流程如下：
RIP實驗步驟
1. 細胞裂解
2. 磁珠準備
3. RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀
4. RNA純化
5. RT-PCR檢測
實驗結(jié)果示例
